鄭州澤銘科技產(chǎn)品——對(duì)蜂蜜中抗生素殘留量的檢測技術(shù)方法

1 主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用微生物管碟法測定蜂蜜中四環(huán)素族抗生素殘留量的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于天然或加工蜂蜜中四環(huán)素族抗生素殘留量的測定。
2 原理
樣品中四環(huán)素族抗生素經(jīng)Mcllvaine緩沖液提取后，用SEP-PAK C18柱純化四環(huán)素族三種抗生素四環(huán)素、土霉素及金霉素利用薄層層析生物檢測法進(jìn)行分離和定性；以蠟樣芽胞桿菌為試驗(yàn)菌株，出微生物管碟法進(jìn)行定量檢測。
3 試劑
所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。
3.1 Mcllvaine緩沖液（PH 4）：稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）27.6g、檸檬酸（C6H8O7·H2O）12.9g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2g，用水溶解后稀釋并定容1000mL。
3.2 0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH4.5）：稱取磷酸氫二鉀13.6g，用水溶解后稀釋并定容1000mL，115℃滅菌30min，置4℃冰箱中保存。
3.3 5%乙二胺四乙酸二鈉鹽水溶液。
3.4 Waters SEP－PAK C18柱（或產(chǎn)PT－C18柱）：用時(shí)先經(jīng)10mL甲醇濾過活化，再用10mL蒸餾水置換，然后用10mL 5%乙二胺四乙酸二鈉鹽流過。
3.5 標(biāo)準(zhǔn)抗生素：四環(huán)素、土霉素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)品由衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所提供。
3.6 抗生素標(biāo)準(zhǔn)原液和稀釋液
3.6.1 抗生素標(biāo)準(zhǔn)原液配制：稱取四環(huán)素、土霉素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量（按效價(jià)進(jìn)行換算），用0.01mol/L鹽酸溶解并定容1000?g/mL，置4℃冰箱中（可使用7天）。
3.6.2 抗生素標(biāo)準(zhǔn)稀釋液配制：臨用前取上述原液按1∶0.8劑距用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液逐步稀釋配制成標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。制備四環(huán)素、土霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度為0.16，0.21，0.26，0.32，0.40，0.50?g/mL，參考濃度為0.25?g/mL；制備金霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度為0.033，0.041，0.051.0.064，0.08，0.10?g/mL，參考濃度為0.05?g/mL。定性試驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)液濃度四環(huán)素、土霉素為2?g/mL，金霉素為1?g/mL。
3.7 展開劑：正丁醇醋酸－水（4∶1∶5）。

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